Potansiyel Alerjen Metiyonin Sentazın S. pombe’de Rekombinant Olarak Üretimi

Abstract

Alerji günümüzün temel sağlık sorunlarından biridir. Alerjik duyarlılığa ve alerjik hastalık bulgularının ortaya çıkmasına neden olan en önemli aeroalerjenlerden biri polenlerdir. Polenlerin alerjenik özellikleri, kimyasal bileşenleri ve atmosferdeki yoğunlukları, iklime, coğrafi lokasyona ve çevresel koşullara göre değişir. Bu etkenler polen alerjisinin tanı ve tedavisinde bazı sorunlara yol açmaktadır. Günümüzde bu sorunları ortadan kaldırabilmek için, yapısal, fonksiyonel ve immünolojik olarak doğal alerjenleri taklit eden rekombinant alerjenleri sabit kalitede ve yeterli miktarda üretebilmek için rekombinant DNA teknolojisi kullanılmaktadır. Bu çalışmanın temel hedefi yerel Morusalba (ak dut) poleninde bulunan potasiyel alerjen metiyoninsentazı Schizosaccharomyces pombe’de rekombinant olarak üretmektir. Çalışmada ilk olarak M. alba’daki polenlerden total RNA izolasyonu yapıldı ve cDNA kütüphanesi oluşturuldu.Metiyoninsentaz (metE) geni bu cDNA kütüphanesinden polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile çoğaltıldı ve nükleotit dizilemesi ile tam gen dizisi belirlendi. metE’nin mekik tipi bir vektör olan pSLF1007 ile ligasyonu sağlandı ve S. pombe’ye bu ligasyon ürününün transformasyonu yapıldı. Transformant kolonilerden protein izolasyonu gerçekleştirildi ve rekombinant proteinin saptanması için Western blot analizi yapıldı. Rekombinant protein histidin etiketine özgü antikor kullanılarak membranda saptandı. Sonuç olarak, M. alba poleninde bulunan metE S .pombe’de başarıyla rekombinant olarak üretildi. Bu çalışmada S. pombe’ninrekombinant alerjen üretimi için alternatif bir sistem olduğu gösterildi. Rekombinant metE ileri klinik çalışmalarda kullanılma, saflaştırıldıktan ve alerjik özellikleri doğrulandıktan sonra piyasada biyoteknolojik bir ürün olarak yer alma potansiyeline sahiptir.

Anahtar Kelimeler: Gen klonlama, Metiyoninsentaz, Morus alba, Rekombinant alerjen, Schizosaccharomyces pombe