Effects of serum starvation and ionomycin activation on the development of somatic cell nuclear transfer embryos in sheep

Abstract

Donör hücrelerin senkronizasyonu ve yeniden yapılandırılmış oositlerin aktivasyonu, somatik hücre klonlamasındaki başarı oranını etkileyen önemli faktörlerdir. Bu çalışmada, Kıvırcık koyunlarında somatik hücre nükleer transferinde serum açlığının donör hücre senkronizasyonuna ve ionomisinin yeniden yapılandırılmış oositlerin aktivasyonuna olan etkileri araştırılmıştır. Donör hücre olarak kullanılan kumulus hücreleri mezbahadan alınan koyun ovaryumundan elde edildi. Bu hücreler çalışmada 4 gün serum açlığına bırakılarak (%0.5 FCS; SS) veya serum açlığına bırakılmadan (%10 FCS; S) kullanıldı. Yeniden yapılandırma sonrası oositlerin aktive olması için ionomisinle 5 dk ve 6-dietilaminopurin ile 3 saat (I+) veya sadece 6-dietilaminopurin ile 3 saat (I-) inkübe edildi. İn vitro kültürün ikinci gününde, bölünmüş embriyolar (n=44) senkronize edilmiş alıcı koyunlara (n=10) transfer edildi. Embriyoların yarıklanma oranları SS/I+, S/I+, SS/I- ve S/I- gruplarında sırasıyla % 37.3; % 44.1; % 34.6 ve % 44.7 bulundu. 18. günde yapılan progesteron analizine göre kan progesteron seviyesi >1 ng/ml olan taşıyıcı koyun oranları sırasıyla % 33.3; %50.0; %50.0 ve %100.0 olarak tespit edildi. Gruplardan da sadece S/I- grubundan tek bir gebelik 40. günden sonra gelişimine devam edebildi. Ancak bu klon kuzu (transfer edilen embriyo sayısına göre, %7.1) doğuma 10 gün kala maternal bir problem (torsiyo uteri) sebebiyle öldü. Bu çalışmanın sonucunda koyunlarda somatik hücre nükleer transferinde serum açlığı ile somatik hücre senkronizasyon ve ionomisin ile oosit aktivasyon yöntemlerine gerek olmadan klon yavru elde edilebileceği ortaya konulmuştur.