Effects of equilibration media and co-culture on vitrification of sheep blastocysts derived in vitro

Abstract

İki vitrifikasyon protokolünün, koyun ovidukt epitel hücreleriyle ko-kültürlü (CC) ve ko- kültürsüz (C) ortamda in vitro üretilmiş olan koyun blastosistlerinin yaşayabilirliği üzerindeki etkileri araştırıldı. Oositler, TCM 199 medyumunda 24 saat süreyle olgunlaştırıldı, 20 saat fertilize edildi ve 9 gün süreyle sentetik ovidukt sıvısı (SOF) medyumunda kültüre edildi. Embriyolar ilk olarak, %20 etilen glikol (EG) veya % 10 gliserol (G) den oluşan iki farklı medyumda ekilibrasyona bırakıldılar. İkinci ekilibrasyon amacıyla % 20 etilen glikol + % 10 gliserol içinde ve 5 dakika süreyle tutuldular. Ardından, % 25 etilen glikol + % 25 gliserol’den oluşan vitrifikasyon solüsyonu içerisinde 30 saniye tutulan embriyolar, derhal sıvı azot içerisine batırılarak donduruldu. Çözdürme işleminin ardından embriyolar, 0.25 M sukroz içine 5 dakika bekletildi, Hepes tamponlu sentetik ovidukt sıvısı (HSOF) içinde yıkandı ve 24 saat süreyle SOF içerisinde in vitro kültüre bırakıldı. Yarıklanma oranları C grubunda %75.2, CC grubunda %74.2, blastosist oranları C'de %14.4, CC grubunda ise %17.1 oldu. Dondurulmuş-çözdürülmüş blastosistlerin in vitro kültüründen sonra canlılık oranları C-EG, CC-EG, C-G ve CC-G gruplarında sırasıyla; %62.1, %38.4, %30.2 ve %39.3 oldu. Bu çalışmada, koyun embriyolarının vitrifikasyonunda; ilk ekilibrasyon medyumu olarak gliserol yerine etilen glikol kullanılmasının faydalı olduğu buna karşılık, koyun ovidukt epiteli hücreleri ile ko-kültürün etkili olmadığı saptandı.